Investigadora santamariana propone

La Dra. Zaida Moya de Calderón, especialista en odontopediatría, doctora en ciencias de la salud, docente del pregrado y especialidad de la facultad de Odontología de la Universidad Católica de Santa María luego de un concienzudo estudio presento la investigacion EXCLUSIÓN Y CULTIVO DE CÉLULAS MADRE DEL TEJIDO PULPAR DE TERCEROS MOLARES IMPACTADOS

La investigadora Santamariana señala en su trabajo que las células madre, stem cell o células troncales son consideradas como uno de los futuros más prometedores en las ciencias de la salud. En la actualidad se investiga las posibles aplicaciones de las células madre de origen dental, su diferenciación celular formando tejido similar a las células que originan dentina, pulpa, periodonto, cemento o hueso alveolar y descubrir cuál puede ser su potencial como terapia celular en la regeneración de los tejidos bucales.

Son células progenitoras con capacidad para autorrenovarse, son clonogénicas y pueden diferenciarse en distintos estirpes celulares, teniendo la capacidad osteo/odontogénica, adipogénica y neurogénica.

Existen diversas formas para su clasificación en función a diferentes criterios: según su origen pueden ser embrionarias o adultas; por su potencial de diferenciación son totipotentes que originan un embrión y un individuo completo, pluripotentes si se diferencian en los tejidos procedentes de las capas embrionarias  (ectodermo, mesodermo y endodermo), multipotentes si originan un subconjunto de tipos celulares que pueden diferenciarse en distintos tipos celulares procedentes de una misma capa embrionaria, oligopotentes que pueden desarrollar un subconjunto de tipos de células, pero mucho más reducido y unipotentes con capacidad para diferenciarse en un único tipo celular.

Actualmente se buscan alternativas para la obtención de células madre adultas, porque el aislamiento y cultivo de las células de la médula ósea ha quedado relegada debido al bajo porcentaje de células obtenidas, por el dolor del paciente durante su obtención y la gran mortalidad que lleva el proceso laboratorial; siendo una alternativa más viable y con menos obstáculos bioéticos las células madre de origen dental.

En la boca existen cinco fuentes de obtención de las células madre: de la pulpa dental, del ligamento periodontal, de los dientes deciduos exfoliados, de la papila dental (cuando la raíz del diente presenta ápice abierto) y del folículo dental (dientes en formación intraósea).

Por esta razón el centro de investigación e innovación tecnológica de la Universidad Católica de Santa María, seleccionó como proyecto de investigación la “Exclusión  y cultivo de las células madre del tejido pulpar de terceros molares”, siendo responsable de su ejecución la Dra. Zaida Moya de Calderón, especialista en odontopediatría e investigadora de nuestra institución.

La Dra. Moya diseñó una investigación laboratorial experimental que consistió en obtener células madre de la pulpa de terceros molares en pacientes voluntarios que asisten a la Clínica Odontológica de la UCSM, el procedimiento laboratorial fue sumamente riguroso, en condiciones asépticas y aplicando las normas de bioseguridad.

La metodología utilizada consistió en una serie de pasos que se inician inmediatamente después de la extirpación de la pulpa del paciente donante, la conservación en el medio adecuado y estandarizado para mantener la vitalidad de las células, la digestión celular usando las enzimas collagenasa y dispasa para separar las células de los tejidos, después de lo cual se realiza la centrifugación de las células para obtener el botón celular, que luego es resuspendido en el medio de cultivo estandarizado: Dulbeccos Modified Eagle Medium (DMEN), suplementado con suero fetal bovino (SFB), solución de antibióticos y antimicóticos.

Las células y el medio de cultivo se depositan en placas con pozos especiales, los que se introducen al incubador de tejidos a 37ºC y 5% de CO₂ para mantener el equilibrio carbonato-bicarbonato, con humedad ambiente elevada y un dispositivo de recirculación de aire en su interior que permite homogenizar la temperatura.

Se renueva el medio completo cada 3 días durante 15 días para eliminar las células contaminantes no adherentes al plástico (propiedad única de las células madre), durante los primeros días las células se observan en el microscopio invertido de forma ovoide, luego en la segunda semana ocurre una estabilización celular y las células se observan muy semejantes a los fibroblastos adquiriendo una forma fibroblastoide.

Después de lograr la confluencia celular, se realiza la liberación de la adherencia de las células madre a la superficie plástica o tripsinización a través de la enzima tripsina.

Se someten las células nuevamente a un proceso de proliferación más selectivo y después de su centrifugación se distribuye el botón celular en los pozos de las cajas de cultivo y se agrega el medio de cultivo completo, se introduce al incubador de células a 37ºC, 5% de CO_2, en condiciones que garantizan el crecimiento celular.

Después de 3 días, se observan los pozos de cultivo en el microscopio invertido para identificar los nichos de células madre, que se deposita en otro pozo al cual se le agrega medio de cultivo completo, ocurre así el primer pasaje o pase celular.

Luego se hace los pases sucesivos celulares cada 3 días de la misma manera que el anterior, las placas con los pozos se observan al microscopio invertido para observar las células coloreadas con azul de trypan y así obtener la lectura del porcentaje aproximado de crecimiento celular.

CONCLUSION

La exclusión y cultivo de células madre del tejido pulpar de terceros molares se logra siguiendo una técnica laboratorial rigurosa, que implica la disposición de todos los reactivos, materiales y medios de cultivo, el estricto control de la cadena aséptica y la constancia para lograr los objetivos propuestos, en un tiempo promedio de 15 días.